Para la realizacion de esta practica utilizamos:
MATERIALES: SUSTANCIAS:
- Vaso de bohemia -Leche descremada
-Varilla de vidrio -Acido etanoico 2.0 M
-Mechero -Hidróxido de sodio al 10%
-Soporte -Sulfato cuprico al 1%
-Gradilla -Acido nítico concentrado
- Tubo de ensayos
-Termómetro
-Papel de filtro
REACCION DE BIURET: QUE ES Y COMO REACCIONA?
La producen los peptidos y proteinas, no los aminoacidos (ya que se debe a la presencia del enlace peptidico). Es una solucion acuosa alcalina ( de NaOH O KOH).
La presencia de proteinas en una mezcla se puede determinar mediante la reaccion de el reactivo de biuret, este mismo contiene CuSo4. La reaccion se basa en la formacion de un compuesto de color violeta, devido a la union de un complejo de coordinacion entre los iones de Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrogeno que forma parte de los enlaces peptidicos presentando un maxiomo de absorcion a 540 mn.
REACCIÓN XANTOPROTEICA: ¿QUE ES Y COMO REACCIONA?
La reacción xantoproteica es un método que se puede utilizar para determinar la cantidad de proteína soluble en una solución, empleando ácido nítrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos aromáticos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali, se torna color amarillo oscuro.
DIÁLISIS:
1) Colocar en un vaso de bohemia del dializador (cuyo fondo es de papel celofan (menbrana semi-permeable)), agua destilada hasta 1/3 de este.
2) La dialisis fue realizada con solucion de ovoalbumina (clara de huevo en agua) y con solucion de gelatina sin sabor.
Esto lo dejamos reposar 30min. Luego sera utilizado en los siguientes ensayos.
PROCEDIMIENTO DE LA PRÁCTICA CON REACTIVO DE BIURET:
1)Colocamos en un tubo de ensayo 1Cm cubico de agua y el reactivo de Biuret (3gotas de hidróxido de sodio al 10% y 2 gotas de solución de sulfato cúprico al 0,1%) Agitamos y lo observamos.
2) colocamos en otro tubo de ensayo 2Cm cúbicos de agua y con la punta de la espátula le agregamos glicina sólida. Agitamos y le agregamos el reactivo de Biuret.
3)Luego disolvimos una pastilla de aspartamo (aspartil) en 6Cm cúbicos de agua.
4)En otro tubo utilizamos 2 Cm cúbicos de la solución anterior (paso 3), le agregamos el reactivo de Biuret. Agitamos y observamos.
5)En otro tubo de ensayo le agregamos 2Cm cúbicos de solución de Ovo albúmina (clara de huevo en agua), le agregamos reactivo de Biuret. Agitamos y lo observamos.
Como vemos en la imagen la solución de glicina dio negativa con el reactivo de Biuret.
Lo mismo sucedió con la solución de aspartamo (dio negativo con reactivo de Biuret).
Como vemos a continuación la solución de ovo-albumina dio positivo con el reactivo de biuret.
REACCIÓN XANTOPROTEICA
1) Colocamos en un tubo de ensayo 2Cm cúbicos de la solución problema de proteína y 1Cm cubico de Ácido nítrico concentrado. Agitamos y observamos.
2) Calentamos, la mezclamos lentamente y observamos.
3) Dejamos enfriar y agregamos poco a poco hidróxido de sodio al 10%
Observamos: Con el ácido nítrico concentrado dio positivo, vemos un color amarillo.
CONTINUACIÓN DE DIÁLISIS PARTE 1.
1) En un tubo de ensayo colocar 2Cm cúbicos de solución contenida en el recipiente exterior del dializador .
2) Agregamos reactivo de Biuret y observamos.
Observaciones: con el reactivo de Biuret dio negativo.En conclusión no hay proteínas presentes.
POSIBLES ERRORES:
El utilizar mediciones aproximadas con las muestras y los reactivos y no utilizar pipetas graduadas, nos puede llevar a obtener resultados erróneos.
Integrantes:
MICAELA WASEM
ANTONELLA TITO
MARCOS SUÁREZ
